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　?。?）嚴格按照熒光顯微鏡廠家說明書要求進行操作，不要隨意改變程序。

　?。?） 觀察對象必須是可自發(fā)熒光或已被熒光染料染色的標本。

　?。?）應(yīng)在暗室中進行檢查。進入暗室后，接上電源，點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后，眼睛*適應(yīng)暗室，再開始觀察標本。

　　（4）載玻片、蓋玻片及鏡油應(yīng)不含自發(fā)熒光雜質(zhì)，載玻片的厚度應(yīng)在0.8～1.2mm之間，太厚可吸收較多的光，并且不能使激發(fā)光在標本平面上聚焦。載玻片必須光潔，厚度均勻，無油漬或劃痕。蓋玻片厚度應(yīng)在0.17mm左右。

　　（5） 熒光幾乎都較弱，應(yīng)在較暗的室內(nèi)進行。

　　（6）防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護眼鏡。

　?。?）選用效果的濾光片組。

　?。?）檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱;標本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱;所以，zui多不得超過2～3h。

　　（9）熒光標本一般不能長久保存，若持續(xù)長時間照射（尤其是紫外線）易很快褪色。因此，如有條件則應(yīng)先照相存檔，再仔細觀察標本。

　?。?0）熒光顯微鏡光源壽命有限，啟動高壓汞燈后，不得在15min內(nèi)將其關(guān)閉，一經(jīng)關(guān)閉，必須待汞燈冷卻后方可再開啟。嚴禁頻繁開閉，否則，會大大降低汞燈的壽命。標本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時，須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源。

　?。?1）標本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā)。

　?。?2）若暫不觀察標本時，可拉過阻光光簾阻擋光線。這樣，既可避免對標本不必要的長時間照射，又減少了開閉汞燈的頻率和次數(shù)。

　　（13）熒光亮度的判斷標準：一般分為四級，即“一”—無或可見微弱熒光。“+”—僅能見明確可見的熒光。“++”—可見有明亮的熒光。“+++”—可見耀眼的熒光。

　?。?4）較長時間觀察熒光標本時，一定要戴能阻擋紫外光的護目鏡，加強對眼睛的保護。在未加入阻斷濾光片前不要用眼直接觀察，否則會損傷眼睛。

　?。?5） 激發(fā)光長時間的照射，會發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象，因此盡可能縮短觀察時間，暫時不觀察時，應(yīng)用擋板遮蓋激發(fā)光。